本发明涉及脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，包括如下步骤：采用乙酸乙酯萃取脂肪乳剂，乙酸乙酯相低温真空旋转蒸干，得残留物1作为供试品；或者加正己烷溶解残留物1，用乙腈萃取，正己烷相备用，乙腈相低温真空旋转蒸干，得残留物2；用乙醇溶解残留物2，依次加入亚硫酸氢钠溶液和乙酸乙酯，用水萃取，水相加盐酸后，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相与正己烷相，低温真空旋转蒸干，得残留物3作为供试品。本发明所提供的脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，有效避免了高温操作和主药紫外吸收对检测结果的干扰，尤其更适用于主药在350nm波长处有紫外吸收乳剂的甲氧基苯胺值测定。
1.一种脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：精密量取主药在350nm波长处有紫外吸收的脂肪乳剂10ml置于分液漏斗中；加2mol/L的盐酸1ml，并沿瓶壁加乙醇1ml，乙酸乙酯10ml，剧烈振摇；静置分层，将上层油相转移至250ml的烧瓶中，下层水相再用乙酸乙酯萃取两次，每次乙酸乙酯10ml，合并油相，即乙酸乙酯液；用旋转蒸发仪低温真空旋转蒸干；残留物加正己烷20ml使溶解并转移至分液漏斗中，用10ml乙腈萃取；分取萃取乙腈液，用旋转蒸发仪低温真空旋转蒸干，萃取正己烷液1备用；浓缩残渣加1ml乙醇溶解后，加1ml10%的亚硫酸氢钠溶液，放置10分钟，加10ml乙酸乙酯并转移至分液漏斗中,用水萃取2次，每次10ml，弃去乙酸乙酯液，合并水层，加2mol/L的盐酸1ml振摇1分钟，用乙酸乙酯20ml萃取，分取乙酸乙酯液用水10ml洗涤，乙酸乙酯液合并至萃取正己烷液1中；乙酸乙酯与正己烷的混合液低温真空旋转蒸干；浓缩残留物用异辛烷溶解并转移置25ml量瓶中用异辛烷稀释至刻度，作为供试品溶液；取供试品溶液，以异辛烷作为空白，照紫外-可见分光光度法，在350nm波长处，测得吸光度值为A₀；精密量取供试品溶液10ml置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液2ml，加塞振摇，避光放置10分钟，另精密量取异辛烷10ml代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白，在350nm波长处，测得吸光度值为A，按如下计算式计算甲氧基苯胺值:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>式中：V为供试品的取样量，单位ml；B为供试品溶液中油相的标示量，单位g/ml。
2.根据权利要求1所述脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，其特征在于，所述低温真空旋转蒸干在60℃以下进行。
3.根据权利要求2所述脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，其特征在于，所述低温真空旋转蒸干在40℃以下进行。
4.权利要求1-3任一项所述脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法在测定脂肪乳剂甲氧基苯胺值中的应用。
5.权利要求4所述应用，其特征在于，所述应用是指权利要求1-3任一项所述脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法在测定鸦胆子油乳注射液、丙泊酚脂肪乳注射液、丁酸氯维地平脂肪乳注射液、尼莫地平脂肪乳注射液、依托咪酯脂肪乳注射液、依托咪酯中长链脂肪乳注射液、丙泊酚中长链脂肪乳注射液、多西他赛脂肪乳注射液、依曲康唑脂肪乳注射液、鱼油脂肪乳注射液、复合脂溶性维生素脂肪乳注射液、棕榈酸地塞米松脂肪乳注射液、全氟碳脂肪乳注射液、紫杉醇脂肪乳注射液、环孢菌素A脂肪乳注射液、阿奇霉素脂肪乳注射液、卡马西平脂肪乳注射液、两性霉素B脂肪乳注射液、羟基喜树碱脂肪乳注射液、地西泮脂肪乳注射液、莪术油脂肪乳注射液、川芎嗪脂肪乳注射液、甲磺酸二氢麦角碱脂肪乳注射液或七氟烷脂肪乳注射液甲氧基苯胺值中的应用。技术领域
本发明涉及一种脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法。
背景技术
现有脂肪乳甲氧基苯胺值测定方法参照中国药典委员会《脂肪乳注射液（C14-C24）质量标准》（征求意见稿）。该方法存在以下缺点和不足之处。1、该方法采用60℃水浴真空旋转蒸发除去水分，温度太高且旋转蒸发时间过长可能导致过氧化物继续降解为醛、酮及小分子醛，经高温真空旋转蒸发可能被除去，导致测定结果的不准确。2、当主药在350nm波长处有紫外吸收时，旋转蒸发除去水分后仍无法测定甲氧基苯胺值。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供一种脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法。本发明所称脂肪乳包括任何形式的营养性脂肪乳和载药脂肪乳。本发明涉及一种脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，所述方法包括如下步骤：采用乙酸乙酯萃取脂肪乳剂，乙酸乙酯相低温真空旋转蒸干，得残留物1作为供试品。或者加正己烷溶解残留物1，用乙腈萃取，正己烷相备用，乙腈相低温真空旋转蒸干，得残留物2；用乙醇溶解残留物2，依次加入亚硫酸氢钠溶液和乙酸乙酯，用水萃取，水相加盐酸后，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相与上述正己烷相，低温真空旋转蒸干，得残留物3作为供试品。作为优化，上述脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，还包括如下步骤：将供试品用异辛烷溶解，作为供试品溶液，以异辛烷作为空白对照，紫外-可见分光光度法测定350nm波长吸光度值A₀。具体可如下操作：量取供试品溶液10ml置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液2ml，加塞振摇，避光放置10分钟，量取异辛烷10ml代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白对照，测定350nm波长吸光度值A₀，按如下标准计算式计算甲氧基苯胺值：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>式中：V为供试品的取样量，单位ml；B为供试品溶液中油相的标示量，单位g/ml。作为进一步优选，本发明涉及的脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，步骤如下：精密量取脂肪乳剂10ml置于分液漏斗中；加2mol/L的盐酸1ml，并沿瓶壁加乙醇1ml，乙酸乙酯10ml，剧烈振摇；静置分层，将上层油相转移至250ml的烧瓶中，下层水相再用乙酸乙酯萃取两次，每次乙酸乙酯10ml，合并油相，即乙酸乙酯液；用旋转蒸发仪低温真空旋转蒸干；残留物加正己烷20ml使溶解并转移至分液漏斗中，用10ml乙腈萃取；分取萃取乙腈液，用旋转蒸发仪低温真空旋转蒸干，萃取正己烷液1备用；浓缩残渣加1ml乙醇溶解后，加1ml10%的亚硫酸氢钠溶液，放置10分钟，加10ml乙酸乙酯并转移至分液漏斗中,用水萃取2次，每次10ml，弃去乙酸乙酯液，合并水层，加2mol/L的盐酸1ml振摇1分钟，用乙酸乙酯20ml萃取，分取乙酸乙酯液用水10ml洗涤，乙酸乙酯液合并至萃取正己烷液1中；乙酸乙酯与正己烷的混合液低温真空旋转蒸干；浓缩残留物用异辛烷溶解并转移置25ml量瓶中用异辛烷稀释至刻度，作为供试品溶液；取供试品溶液，以异辛烷作为空白对照，照紫外-可见分光光度法，在350nm波长处，测得吸光度值为A₀；精密量取供试品溶液10ml置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液2ml，加塞振摇，避光放置10分钟，另精密量取异辛烷10ml代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白对照，在350nm波长处，测得吸光度值为A，按如下计算式计算甲氧基苯胺值:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>式中：V为供试品的取样量，单位ml；B为供试品溶液中油相的标示量，单位g/ml。另一方面，本发明涉及的脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法中，所述低温真空旋转蒸干在60℃以下，优选40℃以下进行。本发明所涉及的脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，可应用于各种脂肪乳中甲氧基苯胺值的测定，包括营养性脂肪乳和载药脂肪乳，比如：鸦胆子油乳注射液、丙泊酚脂肪乳注射液、丁酸氯维地平脂肪乳注射液、尼莫地平脂肪乳注射液、依托咪酯脂肪乳注射液、依托咪酯中长链脂肪乳注射液、丙泊酚中长链脂肪乳注射液、多西他赛脂肪乳注射液、依曲康唑脂肪乳注射液、鱼油脂肪乳注射液、复合脂溶性维生素脂肪乳注射液、棕榈酸地塞米松脂肪乳注射液、全氟碳脂肪乳注射液、紫杉醇脂肪乳注射液、环孢菌素A脂肪乳注射液、阿奇霉素脂肪乳注射液、卡马西平脂肪乳注射液、两性霉素B脂肪乳注射液、羟基喜树碱脂肪乳注射液、地西泮脂肪乳注射液、莪术油脂肪乳注射液、川芎嗪脂肪乳注射液、甲磺酸二氢麦角碱脂肪乳注射液或七氟烷脂肪乳注射液。发明所实现的有益技术效果如下：1.本发明采用乙酸乙酯从乳剂中提取油相，能达到油水分离的效果，低温水浴真空旋转蒸发，，避免了现有技术中采用60℃水浴带来的弊端；2.本发明采用正己烷与乙腈萃取，能够实现油相与主药分离，从而避免主药对检测结果的干扰，尤其是当主药在350nm波长处有紫外吸收时；3.本发明利用10%亚硫酸氢钠与主药层少量的小分子醛反应生成水溶性的α-羟基磺酸钠，实现小分子醛与主药分离，α-羟基磺酸钠再与盐酸反应生成原来的醛，从而避免主药对检测结果的干扰，尤其是当主药在350nm波长处有紫外吸收时。综上所述，本发明所提供的脂肪乳剂甲氧基苯胺值测定方法，有效避免了高温操作和主药紫外吸收对检测结果的干扰，尤其更适用于主药在350nm波长处有紫外吸收乳剂的甲氧基苯胺值测定。
具体实施方式
本发明的最优具体实施过程概述如下：1.油水分离：采用乙酸乙酯萃取乳剂，乳剂中的水溶性成份在水层，脂溶性成份在乙酸乙酯层，主药包含在乙酸乙酯层中。2.油相与主药的分离：将乙酸乙酯液于低温真空旋转蒸干，加正己烷溶解残渣，用乙腈萃取，上层为正己烷（油相），下层为乙腈层（主药及小分子醛）。3.主药与小分子醛的分离：将乙腈液于低温真空旋转蒸干，残渣加1ml乙醇使溶解，1ml10%的亚硫酸氢钠溶液，放置10分钟，加10ml乙酸乙酯并转移至分液漏斗中，用水10ml萃取，小分子醛与亚硫酸氢钠反应生成α-羟基磺酸钠溶于水层，主药留在乙酸乙酯层。4.油相的合并：将水层加盐酸使α-羟基磺酸钠被还原来的小分子醛，用乙酸乙酯萃取水相，合并乙酸乙酯与正己烷液于低温真空旋转蒸干溶剂。上述技术方案能够实现主药与醛酮完全分离。以下列举实施例具体说明本发明。但本发明并不限于下述实施例。实施例1精密量取丙泊酚注射液10ml置于分液漏斗中。加2mol/L的盐酸1ml，并沿瓶壁加乙醇1ml，二氯甲烷或三氯甲烷10ml，剧烈振摇。静置样品无法分层，因此二氯甲烷、三氯甲烷作萃取剂不适用。实施例2精密量取丙泊酚注射液10ml置于分液漏斗中。加2mol/L的盐酸1ml，并沿瓶壁加乙醇1ml，乙酸乙酯10ml，剧烈振摇。静置分层，将上层油相转移至250ml的烧瓶中。下层水相再用乙酸乙酯萃取两次，每次乙酸乙酯10ml，合并油相，即乙酸乙酯液。用旋转蒸发仪在40℃以下浓缩。残留物用异辛烷溶解并转移置25ml量瓶中用异辛烷稀释至刻度，作为供试品溶液。取供试品溶液，以异辛烷作为空白，照紫外-可见分光光度法，在350nm波长处，测得吸光度值为A0。精密量取供试品溶液10ml置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液（临用新配）2ml，加塞振摇，避光放置10分钟，另精密量取异辛烷10ml代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白，在350nm波长处，测得吸光度值为A，按《脂肪乳注射液（C14-C24）质量标准》（征求意见稿）中的如下标准计算式计算甲氧基苯胺值。计算公式：ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="700"/>式中：V为供试品的取样量，单位ml；B为供试品溶液中油相的标示量，单位g/ml；1.2为：加入4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。同时测定6份样品的结果分别为：2.05、2.11、2.09、2.04、2.01、1.99。实施例3精密量取丙泊酚注射液10ml置于分液漏斗中。加2mol/L的盐酸1ml，并沿瓶壁加乙醇1ml，乙酸乙酯10ml，剧烈振摇。静置分层，将上层油相转移至250ml的烧瓶中。下层水相再用乙酸乙酯萃取两次，每次乙酸乙酯10ml，合并油相，即乙酸乙酯液。用旋转蒸发仪在60℃以下浓缩。残留物用异辛烷溶解并转移置25ml量瓶中用异辛烷稀释至刻度，作为供试品溶液。取供试品溶液，以异辛烷作为空白，照紫外-可见分光光度法，在350nm波长处，测得吸光度值为A0。精密量取供试品溶液10ml置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液（临用新配）2ml，加塞振摇，避光放置10分钟，另精密量取异辛烷10ml代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白，在350nm波长处，测得吸光度值为A，并计算甲氧基苯胺值。同时测定6份样品的结果分别为：3.26、3.89、2.78、3.31、4.24、3.82。实施例4精密量取丁酸氯维地平脂肪乳注射液10ml置于分液漏斗中。加2mol/L的盐酸1ml，并沿瓶壁加乙醇1ml，乙酸乙酯10ml，剧烈振摇。静置分层，将上层油相转移至250ml的烧瓶中。下层水相再用乙酸乙酯、萃取两次，每次乙酸乙酯10ml，合并油相，即乙酸乙酯液。用旋转蒸发仪在40℃以下浓缩。残留物加正己烷20ml使溶解并转移至分液漏斗中，用10ml乙腈萃取。分取萃取乙腈液（溶解有主药及小分子醛），用旋转蒸发仪在40℃以下浓缩，萃取正己烷液1备用。浓缩残渣加1ml乙醇溶解后，加1ml10%的亚硫酸氢钠溶液，放置10分钟，加10ml乙酸乙酯、并转移至分液漏斗中,用水萃取2次，每次10ml，弃去乙酸乙酯液，合并水层，加2mol/L的盐酸1ml振摇1分钟，用乙酸乙酯20ml萃取，分取乙酸乙酯液用水10ml洗涤，乙酸乙酯液合并至萃取正己烷液1中。乙酸乙酯与正己烷的混合液在40℃以下浓缩。浓缩残留物用异辛烷溶解并转移置25ml量瓶中用异辛烷稀释至刻度，作为供试品溶液。取供试品溶液，以异辛烷作为空白，照紫外-可见分光光度法，在350nm波长处，测得吸光度值为A0。精密量取供试品溶液10ml置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液（临用新配）2ml，加塞振摇，避光放置10分钟，另精密量取异辛烷10ml代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白，在350nm波长处，测得吸光度值为A，按《脂肪乳注射液（C14-C24）质量标准》（征求意见稿）中的如下标准计算式计算甲氧基苯胺值。计算公式：ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="700"/>式中：V为供试品的取样量，单位ml；B为供试品溶液中油相的标示量，单位g/ml；1.2为：加入4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。同时测定6份样品的结果分别为：2.20、2.24、2.18、2.31、2.13、2.40。显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的构思和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。